1  萝卜硫苷的测定

1.1　仪器

1.1.1　高效液相色谱仪：附紫外检测器

1.1.2　分析天平：感量为0.01mg

1.1.3　纯水发生器

1.1.4　超声波振荡器

1.2　试剂

1.2.1　四丁基硫酸氢胺（TBAS）：试剂级

1.2.2　乙腈：HPLC级

1.2.3　甲醇：HPLC级

1.2.4　标准品：萝卜硫苷钾盐（Glucoraphanin Potassium Salt），Chromadex或等同标准品。

1.3　色谱条件

1.3.1　色谱柱：C18，4.6×250mm，5µm。

1.3.2　流动相：以0.1%TBAS aqueous buffer为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱。

1.3.3　检测波长：225nm

1.3.4　柱温：40℃

1.3.5　流速：1.0mL/min

1.3.6　进样体积：5µL

1.3.7　运行时间：55min

1.4　流动相的配制：称取1.0g四丁基硫酸氢胺于烧杯中，加入1L水，搅拌溶解后过滤，脱气待用。

1.5　萃取液的配制：色谱纯乙腈与高纯度水按照体积比1:1混合均匀后脱气待用。

1.6　标准溶液的配制：准确称取约7.0mg萝卜硫苷钾盐标准物质于10mL容量瓶中，加入萃取液溶解，定容，摇匀，作为萝卜硫苷钾盐标准储备液。准确量取1.0mL萝卜硫苷钾盐标准储备液于10mL容量瓶中，加入萃取液溶解，定容，摇匀，即得。

1.7　样品溶液的配制：取20粒样品研磨粉碎，称取2.2g于50mL离心管中，加入25mL流动相，旋涡振荡混合10sec，放入超声波振动器中超声提取20min，置70℃水浴中加热30min，每10min漩涡振荡约10sec，在振荡器上振荡30min，以3000r/min离心3min，取上层清液，用0.45μm有机系针头过滤器过滤上层清液至液相色谱仪样品瓶中待进样。          

1.8　结果计算

std.Wt×P×A

C = ————————

D₁×D₂

式中：

C—标准溶液的浓度，mg/mL；

std.Wt—称取标准品的的重量，mg；

P—标准品的纯度（100%纯标准品，P=1）；

A—移取标准储备液的体积，mL；

D₁—标准储备液定容体积，mL；

D₂—标准工作液定容体积，mL；

0.92—萝卜硫苷钾盐（分子量475.60）换算为萝卜硫苷（分子量437.51）的比值。

Astd

R.F.= ————

Cstd

式中：

R.F.—样品中校准相应因子；

Astd—标准工作液于225nm波长的吸收峰面积；

Cstd—标准工作液浓度，mg/mL。

Asmp×D

X = ————————

Smp.Wt×R.F.

式中：

X—样品中萝卜硫苷的含量，mg/g；

Asmp—样品于225nm波长处的吸收峰面积；

Smp.Wt—样品重量，g；

R.F.—校准因子；

D—萃取液体积，mL。