1  粗多糖的测定

1.1  原理：样品提取液经淀粉酶酶解后用乙醇沉淀分离，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，再与苯酚-硫酸作用形成有色化合物，其呈色强度与溶液中糖的浓度成正比，于485nm波长处比色定量。

1.2  仪器

1.2.1  紫外分光光度计

1.2.2  离心机

1.2.3  水浴锅

1.3  试剂

1.3.1  D-无水葡萄糖对照品：购自中国食品药品检定研究院，含量99.5%。

1.3.2  硫酸溶液

1.3.3  无水乙醇：分析纯

1.3.4  苯酚：分析纯

1.3.5  浓硫酸：分析纯

1.3.6  α-淀粉酶

1.3.7  0.2M磷酸盐缓冲溶液（pH值参考淀粉酶最适pH值）

1.3.8  硫酸溶液（2mol/L）：取112mL浓硫酸加入到800mL水中，混匀，冷却后稀释至1000mL。

1.3.9  苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并定容至100mL，混匀。溶液置冰箱中可保存1个月。

1.3.10  葡萄糖对照品溶液：取干燥至恒重的葡萄糖标准品0.010g，精密称量后加水溶解并定容至100mL，混匀，每1mL约含葡萄糖0.1mg。

1.4  样品处理

1.4.1  样品提取：取10g样品，研碎后过60目筛，取粉末约2.0g，精密称定，置于150mL三角瓶中（加玻璃珠数粒），加水50mL，盖塞。100℃水浴提取60min，取出，放冷，加磷酸盐缓冲溶液0.5mL，加α-淀粉酶液0.1mL或（0.1g），置淀粉酶最适宜温度的水浴锅中酶解60min后取出，置电炉上小心加热至沸（灭酶），冷却后转移至100mL容量瓶中，洗涤三角瓶数次，补加水至刻度，摇匀后过滤，弃去初滤液，收集续滤液供沉淀粗多糖。

1.4.2  沉淀粗多糖：准确吸取滤液2.0mL于10mL离心管中，加入无水乙醇8mL，摇匀后静置2h以上，以3000r/min离心5min，沉淀以80%乙醇溶液洗涤，离心，弃去上清液，反复操作数次。沉淀以2mol/L的硫酸5mL溶解，转移至50mL的容量瓶中，以水定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

1.5  标准曲线的绘制：精密吸取葡萄糖标准使用液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL，分别置于25mL比色管中，补加水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，于漩涡混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸15min，冷却后用分光光度计于485nm波长处，以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

1.6  样品测定：准确吸取供试品溶液2.0mL，按1.8项标准曲线的绘制步骤于485nm波长处测定吸光度值，根据标准曲线计算得测定液中多糖含量。

1.7  结果计算

                  C×V1×V3×100

            X = —————————

                     M×V2×103

    式中：

        X—样品中粗多糖含量（以葡萄糖计），g/100g；

        C—样品测定液中粗多糖浓度，mg/mL；

        V1—样品提取液体积，mL；

        V2—沉淀粗多糖所用样品提取液体积，mL；

        V3—粗多糖溶液的定容体积，mL。

        M—样品重量，g。