1  粗多糖的测定

1.1  原理：样品经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛，再与蒽酮缩合显蓝绿色，与标准系列比较定量。

1.2  仪器：分光光度计

1.3  试剂

1.3.1  亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL，即得。

1.3.2  醋酸锌溶液：称取21.9g醋酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL，即得。

1.3.3  0.5%硫酸-蒽酮溶液：称取0.5g蒽酮，加浓硫酸溶解至100mL，即得。

1.4  样品处理：称取一定量样品（0.5g左右），加入50mL80%乙醇，超声振荡提取30min，过滤，80%乙醇洗涤残渣至淡黄色近无色后，用热水分次溶解转移残渣至100mL容量瓶中，加3mL亚铁氰化钾溶液、3mL醋酸锌溶液，加水至刻度，混匀，静止，过滤，滤液备用。

1.5  标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.3mL（相当于葡萄糖标准0、10、20、30、40、60μg），分别置于10mL具塞试管中，加水补足至1mL，加入4mL0.5%硫酸-蒽酮溶液，混匀。置沸水浴中加热5min， 迅速用凉水冷却，用分光光度计于620nm波长处测定吸光度值。以葡萄糖含量对吸光度值绘制标准曲线。

1.6  样品测定：准确吸取样品滤液0.5～1.0mL，分别置于10mL具塞试管中，其余操作步骤同1.5项标准曲线的绘制。以测出的吸光度值在标准曲线上查得分析样液中葡萄糖含量（μg）。

1.7  结果计算

  c    V₁

X = （——×——）/10000

  m    V₂

式中：

X—样品中粗多糖含量（以葡萄糖计），g/100g；

　　    c—由标准曲线查得或由回归方程算得样品测定液中葡萄糖含量，μg；

　　    V₁—样品定容总体积，mL；

　　    V₂—测定用样品的体积，mL；

　　    m—样品质量，g。