1  10-羟基-2-癸烯酸的测定

1.1  原理：蜂王浆制品中10-羟基-α-癸烯酸用甲醇提取，于高效液相色谱仪中反相分离后，紫外检测器检测，以外标法定量。

1.2  仪器

1.2.1  高效液相色谱仪：附紫外检测器

1.2.2  超声波振荡器

1.2.3  微孔过滤器（滤膜0.45μm）

1.3  试剂

1.3.1  甲醇：色谱纯

1.3.2  水：三蒸水，经Milli-Q超纯处理。

1.3.3  磷酸：优级纯

1.3.4  10-羟基-α-癸烯酸标准品：购自中国食品药品检定研究院

1.3.5  标准溶液：准确称取10-羟基-α-癸烯酸标准品12.5mg，置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解，摇匀并稀释至刻度，此储备液每1mL含10-羟基-α-癸烯酸0.5mg。

1.4  色谱条件

1.4.1  色谱柱：ODS C₁₈柱，250mm×4.6mm，5µm。

1.4.2  流动相：甲醇-水-磷酸=50:50:0.2（v/v/v）

1.4.3  检测波长：210nm

1.4.4  灵敏度：0.001

1.4.5  流速：1mL/min

1.4.6  进样量：10～20μL

1.5  样品处理：准确称取样品100～200mg，置于25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，超声波振荡助溶，过滤，弃去初滤液，准确吸取0.1～0.2mL续滤液，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

1.6  标准曲线的绘制：分别准确吸取储备液0.1、0.2、0.3、0.4、0.6mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，使10-羟基-α-癸烯酸浓度为5、10、15、20、30μg/mL，各取10μL注入高效液相色谱仪中，以10-羟基-α-癸烯酸峰面积为纵坐标，标准浓度为横坐标，绘制标准曲线。

1.7  样品测定：以上样品提取液经0.45μm滤膜精滤后，取10～20μL于高效液相色谱仪进行测定，记录组分峰面积，在标准曲线上查出相应的10-羟基-α-癸烯酸质量。

1.8  结果计算

c×n

X = —————×100

m×10⁶

式中：

X—样品中10-羟基-α-癸烯酸的含量，g/100g；

        c—由标准曲线上查出的相应10-羟基-α-癸烯酸质量，μg；

        n—样液稀释倍数；

        m—样品质量，g；

       10⁶—μg换算成g的换算系数。