1  粗多糖的测定
1.1  原理：样品中分子量小于10000的高分子物质在800mL/L乙醇溶液中沉淀，与水溶性单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀多糖，用苯酚-硫酸反应，以碳水化合物比色测定其含量，其颜色强度与粗多糖中葡萄糖的含量成正比，以此算出样品中粗多糖含量。
1.2  试剂 
    除特殊注明外，本方法所用试剂均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。 
1.2.1  乙醇溶液（800mL/L）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。
1.2.2  氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
1.2.3  铜储备液：称取3.0g CuSO₄·5H₂O、30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
1.2.4  铜试剂溶液：取铜储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。临用新配。
1.2.5  洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
1.2.6  硫酸溶液（100mL/L）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
1.2.7  苯酚溶液（50g/L）称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀，溶液置于冰箱中可保存1个月。 
1.2.8  葡萄糖标准储备溶液：精密称取干燥恒重的葡萄糖标准品0.5000g，加水溶解并定容至50mL，混匀，置于冰箱中保存。此溶液1mL含葡萄糖10.0mg。
1.2.9  葡萄糖标准使用液：吸取葡萄糖标准储备溶液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置于冰箱中保存。此溶液1mL含葡萄糖0.10mg。
1.3  仪器

1.3.1  分光光度计 
1.3.2  离心机 
1.3.3  旋转混匀器 
1.4  标准曲线的制备：精密吸取葡萄糖标准使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡萄糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、1.00mg），分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置于沸水浴中煮沸2min，冷却后用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
1.5  样品处理
1.5.1  沉淀粗多糖：精密吸取液体样品0.2g，置于50mL离心管中，加入无水乙醇20mL，混匀后以3000r/min离心5min，弃去上清液。残渣用800mL/L乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3～4次。残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀后供沉淀葡萄糖。 
1.5.2  沉淀葡萄糖：精密取1.5.1项下终溶液2mL，置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL、铜试剂溶液2.0mL，置沸水浴中煮沸2min，冷却后以3000r/min离心5min，弃去上清液。残渣用800mL/L乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用100mL/L硫酸溶液2.0mL溶解并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液为样品测定液。
1.6  样品测定：精密吸取样品测定液2.0mL，置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，于旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置于沸水浴中煮沸2min，冷却至室温后，用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖质量，计算样品中粗多糖含量，同时做样品空白试验。
1.7  结果计算
            X = （W1-W2）/（M×V2/V1×V4/V3×V6/V5）
    式中：

        X—样品中粗多糖含量（以葡萄糖计），mg/g；
        W1—样品测定液中葡萄糖质量，mg；
        W2—样品空白液中葡萄糖质量，mg；
        M—样品质量，g；
        V1—样品提取液总体积，mL；
        V2—沉淀粗多糖所用样品提取液体积，mL；
        V3—粗多糖溶液体积，mL；
        V4—沉淀葡萄糖所用粗多糖溶液体积，mL；
        V5—样品测定液总体积，mL；
        V₆—沉淀用样品测定液体积，mL。