1  诱惑红的测定

1.1  原理：样品经溶解、稀释、过滤后，使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪测定诱惑红，根据色谱峰的保留时间定性，外标法峰面积定量。

1.2  试剂

1.2.1  甲醇：色谱纯

1.2.2  聚酰胺粉：过100目筛

1.2.3  乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵加水至1000mL，溶解，经0.45μm滤膜过滤。

1.2.4  甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇60mL、甲酸40mL，混匀。

1.2.5  无水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取无水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL，混匀。

1.2.6  柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至100mL，混匀。

1.2.7  pH6的水：水加柠檬酸溶液调pH值至6。

1.2.8  诱惑红标准溶液：准确称取0.1g诱惑红标准品于100mL容量瓶中，用纯水溶解并定容，配成1.00mg/mL的储备液，备用。临用前用水稀释成所需使用液。

1.3  仪器：高效液相色谱仪（附紫外检测器）

1.4  色谱条件

1.4.1  色谱柱：ODS C₁₈柱，150×4.6mm，5μm。

1.4.2  流动相：甲醇-乙酸氨溶液（0.02mol/L）=35:65，梯度洗脱，甲醇：20～35%，3%/min；35～98%，9%/min；98%继续6min。

1.4.3  检测波长：254nm

1.4.4  柱温：室温

1.4.5  流速：1mL/min

1.5  样品处理：取样品6片，精密称取，放入100mL烧杯中，加水30mL，置60℃水浴中使其完全溶解。样品溶液加柠檬酸溶液调pH值至6，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60℃的水（pH4.0）洗涤3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3～5次，再用水洗至中性，用无水乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解并定容至5mL，经0.45μm滤膜过滤，取10μL进高效液相色谱仪。

1.6  测定：分别取1μL标准液及样品处理液注入色谱仪中，以保留时间定性，峰面积定量。

1.7  结果计算

A₁×C×V

X = ——————

A₂×M

式中：

X—样品中诱惑红的含量，mg/kg；

A₁—样品溶液的峰面积；

A₂—标准溶液的峰面积；

C—标准溶液的浓度，mg/L；

V—样品稀释体积，mL；

M—样品称取量，g。